秋冬季節(jié),很容易遇到雨雪霧等天氣,大家如果是自己駕車,就會(huì)發(fā)現(xiàn)在大霧或大雨環(huán)境中,相同的距離下車頭燈發(fā)出的光較正常天氣的透過(guò)率變低,仿佛光被大霧或者大雨吸收了。
而且霧或雨越大,透過(guò)率就越低,光被吸收的越多。
在紫外可見(jiàn)檢測(cè)器中我們可以認(rèn)為氘燈就是車頭燈,而流通池就是開(kāi)車的道路,流通池中的液體樣品就是大霧或者大雨。
朗博比爾定律的表達(dá)式如下:
在這個(gè)公式中A是指吸光度,I是指透過(guò)光強(qiáng)度,I0是指入射光強(qiáng)度,T是指透過(guò)率。
也可以寫(xiě)成如下公式:
這里的b是指光程長(zhǎng)度,光程長(zhǎng)度越長(zhǎng),吸光度越強(qiáng),也就是在開(kāi)車時(shí),大霧大雨天氣下距離越遠(yuǎn),可見(jiàn)度越低。
而c是指吸光物質(zhì)的濃度,待測(cè)組分濃度越高吸光度越大,也就是大霧或大雨越大,能見(jiàn)度越低。
ε叫做摩爾吸光系數(shù),它在固定波長(zhǎng)下是個(gè)常數(shù),能夠影響它的是化合物的分子結(jié)構(gòu)。
對(duì)于許多的有機(jī)化合物而言,分子中價(jià)電子的躍遷需要吸收波長(zhǎng)在200-1000nm范圍內(nèi)的光。
而這恰好落在紫外可見(jiàn)光區(qū)域,這也是紫外可見(jiàn)檢測(cè)器名字的由來(lái)。
在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)中,能夠產(chǎn)生紫外吸收的大多是一些不飽和基團(tuán),我們把這些能夠產(chǎn)生紫外吸收的基團(tuán)稱為生色團(tuán)。
不同生色團(tuán)的摩爾吸光系數(shù)是不同的,所以不同物質(zhì)的吸光度不同,也就會(huì)影響該物質(zhì)在紫外檢測(cè)器中的靈敏度。
另外,還有些基團(tuán)它們本身是不產(chǎn)生紫外吸收的,但是當(dāng)它們和這些有紫外吸收的基團(tuán)結(jié)合時(shí),會(huì)引起吸收峰的位移以及吸收強(qiáng)度的改變,我們把這些基團(tuán)稱為助色團(tuán)。
這也是為什么有些化學(xué)物質(zhì)它們的生色團(tuán)相同,但是紫外吸收波長(zhǎng)不同,靈敏度也不同的原因。
另外,由于物質(zhì)分子對(duì)不同波長(zhǎng)處的光吸收程度不同,為了獲得更高的靈敏度,我們就要選擇一個(gè)紫外吸收波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定。
對(duì)于大多數(shù)的同學(xué)來(lái)說(shuō)選擇化合物的紫外吸收波長(zhǎng)可以通過(guò)文獻(xiàn)或者網(wǎng)站查詢。
或者有些實(shí)驗(yàn)室如果有二級(jí)管陣列檢測(cè)器,通過(guò)全波長(zhǎng)掃描,然后再用光譜軟件分析,也可以尋找到合適化合物的紫外吸收波長(zhǎng)。
但值得注意的是:選擇化合物的紫外吸收波長(zhǎng)應(yīng)該避開(kāi)流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)20nm左右,避免流動(dòng)相的干擾。
例如,對(duì)于常用的乙腈來(lái)說(shuō),它的截止波長(zhǎng)是190nm,那么化合物的檢測(cè)波長(zhǎng)應(yīng)該選擇在210nm以上。
對(duì)于使用液相色譜的同學(xué)來(lái)說(shuō),紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器應(yīng)該是常用的一款檢測(cè)器,它占了所有液相檢測(cè)器使用率的70%左右。